ATP熒光檢測儀利用ATP試劑中若干組分如熒光素-熒光素酶等與被測樣本反應產生光子，再利用專門研制的熒光檢測儀來捕捉和檢測發光值，由于被測樣本所含細菌等微生物的數量與所含的ATP值、以及ATP值與發光值之間存在一定的函數關系，因此通過檢測發光值即能得到被測標本所含細菌等微生物含量。
在使用時，如果用戶已有控制點菌落總數標準平板計數標準,可將ATP檢測結果與之參照,但請注意ATP是來自于微生物或有機物殘留,所以只能說ATP水平與微生物數目有著密切的相關性,ATP檢測與平板計數結果間不能完*一一對應，但有密切的相關性，這樣就能判斷這些地方是否消毒干凈，非常方便。
基于螢火蟲發光原理，利用“熒光素酶—熒光素體系”快速檢測三磷酸腺苷(ATP)。ATP拭子含有可以裂解細胞膜的試劑，能將細胞內ATP釋放出來，與試劑中含有的特異性酶發生反應，產生光，再用熒光照度計檢測發光值，微生物的數量與發光值成正比，由于所有生物活細胞中含有恒量的ATP，所以ATP含量可以清晰地表明樣品中微生物與其他生物殘余的多少，用于判斷衛生狀況。
ATP熒光檢測儀的檢測作用：
檢測的是物體表面的總菌數，可以立即告知物體表面的潔凈度狀況，可以作為即時預警，彌補傳統方法的不足,但又與傳統培養法相互補充,根據ATP熒光檢測儀檢測數據趨勢掌控清洗衛生狀況，檢測的可重復性是衡量其性能的重要指標。
